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基因擴(kuò)增儀的基本要素分析
更新時(shí)間:2022-11-25   點(diǎn)擊次數(shù):1788次
  基因擴(kuò)增儀是一款多功能、多用途的PCR儀,可滿足不同PCR反應(yīng)管、不同孔數(shù)及不同類型PCR實(shí)驗(yàn)要求。優(yōu)異的升降溫速度、溫度控制保證了實(shí)驗(yàn)快速、準(zhǔn)確,超大屏幕顯示和人性化的操作界面使操作更簡(jiǎn)單易懂。
 
  基因擴(kuò)增儀的基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的:
 
  1、DNA模板:待拷貝的DNA稱為模板,它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA,擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。
 
  2、引物:是DNA復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過(guò)程中的晶核,引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
 
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復(fù)制的動(dòng)力,在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。
 
  4、緩沖液:提供DNA合成反應(yīng)所需的pH,離子強(qiáng)度等環(huán)境。
 
  5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
 
  它可以在試管里建立反應(yīng),經(jīng)過(guò)數(shù)小時(shí)之后,就能將極微量的目的基因或者某一特定的DNA段擴(kuò)增數(shù)十萬(wàn)倍,乃至千百萬(wàn)倍,而無(wú)需通過(guò)繁瑣費(fèi)時(shí)的基因克隆程序,便可獲得足夠數(shù)量的精確的DNA拷貝,所以有人亦稱之為無(wú)細(xì)胞的分子克隆法。
 
  PCR反應(yīng)一般設(shè)置20~40次循環(huán),每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應(yīng)。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個(gè)循環(huán)的模板。PCR的擴(kuò)增效率很高,如果循環(huán)次數(shù)是30次,那么新生DNA段理論上達(dá)到230拷貝(約為109個(gè)分子)。擴(kuò)增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記,使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結(jié)合,擴(kuò)增結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)并輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),實(shí)時(shí)輸出量化結(jié)果。
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